YY/T 0127. 7一2001 口腔材料生物學評價 第2單元:口腔材料生物試驗方法牙髓牙本質應用試驗（完整版）
YY/T 0127. 7一2001.Biological evaluation of dental materials-Part 2:Biological evaluation test method of dental materials-Pulp and dentine usage test.
8試驗步驟
8.1動物準備 .
選擇足夠的動物,以保證每個試驗周期中至少有七顆牙齒含試驗材料,四顆牙齒含陰性對照材料。如有必要每-試驗周期還應有四個陽性對照窩洞。
8.2牙齒預備
8.2.1用合 適的麻醉劑對動物實行全身麻醉.去除牙國所有牙石及菌斑。用3%(V/V)過氧化氫清沽、消毒牙齒表面,然后用含碘或洗必泰的消毒劑消毒。
在水噴等下,用鋒利鉆針在牙齒頰側或唇側頸部制備所衢數(shù)量的V類潤。洞底剩余牙本質厚度小于1mm,但不暴露牙髓、除充填試驗材料要求不同的操作外.均應用水清洗窩洞并用脫脂棉擦干窩洞。
注，若動物有明品齦炎,則應在窩溺制備前幾天去除牙石及軟垢,甚至需重復潛齒直至想炎得到控制。
8.2.2按隨機分配的原則,每 -試驗周期至少用試驗材料充填七個窩洞,陰性對照材料充填四個窩洞。如有必要每一-試驗周期還應有四個陽性對照窩洞。對于以前有陽性對照數(shù)據庫的試驗室,不必再做陽性對照試驗,除非有時需驗證陽性反應。
注:在陰性對照氧化鋅丁香酚水門汀上可用粘接技術充填復合樹脂或充填玻璃離子水門汀(尤其是長期組)。
9術后觀察
9.1在試驗期中,定期觀察每只動物的反應,如飲食改變或口腔組織的炎癥或化膿。
9.2 切片制備
9.2.1在7d士2d、28d士3d及70d士5d,用過量麻醉劑處死足夠數(shù)最的動物,以得到每個試驗周期至少七顆含試驗材料的牙齒。檢查充填體、牙齒及其支持組織,記錄任何異常現(xiàn)象。取下每一-包含牙齒及其周圍軟硬支持組織的組織塊,用中性福爾馬林緩沖液固定。如在處死時，切取組織塊前如用血管內濫注法固定可獲得更好的固定效果。
9.2.2固定后,用臺適的脫鈣劑脫鈣[如10%(V/V)甲酸成pH7. 4的0.5 mol/L EDTA液]。石蠟包埋,連續(xù)切片。通過牙齒窩洞沿長軸進行切片,切片厚5 pm~10 pm.間隔取片,HE染色。必要時用合適的細曹染色方法(如Brown and Brenn)或其他檢測微獬的染色方法對剩余切片染色。
10牙本質及牙髓評價
盲法檢查{片(事先不知是試驗切片或對照切片)。對每-連續(xù)切片,詳細描述并記錄牙本質牙髓及根周組織的全部組織學特點，包括任何可能由窩固制備所引起的組織學變化(包括:表層及深層牙髓組織中炎癥細胞的數(shù)量及密度;切割的牙本質小管牙酷端的成牙本質細胞層的變化.如細胞數(shù)目的減少及移位入牙本質小管的細胞數(shù)量;牙髓充血及出血情況;修復性牙本質的有無及數(shù)量;窩銅壁的變色情況等)。牙髓的炎癥反應表現(xiàn)較常見,可從連續(xù)切片中,通過窩洞等間距地選擇至少5張切片。按下列分級方法對牙髓組織炎癥沒潤進行分級。
